NobleRyder AMPPD發(fā)光顯色試劑盒
NobleRyder AMPPD發(fā)光顯色試劑盒 即用型液體試劑 P9871-25T
AMPPD發(fā)光顯色試劑盒
產(chǎn)品簡介：
AMPPD是堿性磷酸酶的化學發(fā)光底物，在適宜的緩沖液中，隨著酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者發(fā)出強度很高的光信號，其發(fā)光的速度取決于堿磷酶的濃度。當堿磷酶偶合到雜交的探針時，便可以通過此系統(tǒng)檢測到雜交分子的存在量。乙醇胺可使光信號輸出更理想。AMPPD為1，2-二氧環(huán)已烷衍生物，它是一種生物化學領域中新的超靈敏的堿性磷酸酶底物，其特點：反應速度快，在很短時間內(nèi)提供正確可靠的結(jié)果。在它的分子結(jié)構(gòu)中有兩個重要部分，一個是聯(lián)接苯環(huán)和金剛烷的二氧四節(jié)環(huán)，它可以斷裂并發(fā)射光子；另一個是磷酸根基團，它維持著整個分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在通常情況下，這種化合物很穩(wěn)定。但是，結(jié)果有堿性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate作為酶的底物會在酶的催化一脫去磷酸根基團，形成一個不穩(wěn)定的中間體。這個中間體隨即自行分解（二氧四節(jié)環(huán)斷裂），同時發(fā)射光子。Leagene AMPPD發(fā)光顯色試劑盒適用于PVDF膜，不推薦用于硝酸纖維素膜。
NobleRyder AMPPD發(fā)光顯色試劑盒
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P9871 25T | P9871 50T | Storage | |
試劑(A): Dioxetane Buffer | A1: Dioxetane A | 50ml | 100ml | -20℃ |
A2: Dioxetane B | 50ml | 100ml | -20℃ | |
臨用時，取A1、A2等量混合，即為Dioxetane Buffer，不可預先配制。 | ||||
試劑(B): AMPPD | 2.5mg | 5mg | -20℃ 避光 | |
自備材料：
1、轉(zhuǎn)印了蛋白并已以抗體-酶復合物檢測過的PVDF膜
2、Tris鹽緩沖液(TBS)
3、透明的塑料保鮮膜
4、蒸餾水
操作步驟(僅供參考)：
1.臨用前，取適量的A1和A2，等量混合后獲得Dioxetane Buffer。
2.按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即為AMPPD Dioxetane Buffer(發(fā)色發(fā)光顯跡液)，用于膜的染色。
3.取適量Dioxetane Buffer洗膜兩次，每次15min。
4.對于PVDF膜進行的堿性磷酸酶反應, 膜置于新鮮配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用5min。
5.將膜移入適量的AMPPD Dioxetane Buffer中，浸泡5min(AP反應)。
6.取出PVDF膜，滴干水分，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊將膜包裹起來，成為不漏水的封閉體。
7.在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光數(shù)秒至數(shù)小時。
8.如需要，在室溫下以適量的TBS洗膜15min。
9.將膜放入AMPPD Dioxetane Buffer，條帶應在10~30min內(nèi)出現(xiàn)。
10.用蒸餾水洗膜，終止反應。晾干后拍照留永jiu的記錄。
注意事項：
1、 PVDF膜置于膠片上后，不要改變位置。
2、 曝光時間應根據(jù)實驗情況，自行摸索。
3、 配制好的AMPPD Dioxetane Buffer，應避光低溫保存。
4、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期： 12個月有效。
NobleRyder AMPPD發(fā)光顯色試劑盒
